Cytizinas (taip pat žinomas kaip baptotoksinas) yra svarbus alkaloidas, išgaunamas iš ankštinių augalų, tokių kaip *Sophora alopecuroides* ir *Thermopsis lanceolata*. Jis plačiai naudojamas tokiose srityse kaip farmacija, augalų apsauga ir biologiniai agentai; produkto grynumas tiesiogiai nulemia jo panaudojimo efektyvumą ir atitiktį reglamentams. Šiuo metu pramoniniai citizino grynumo tyrimo metodai yra suskirstyti į tris tipus, atsižvelgiant į tikslumą, kainą ir taikymo scenarijų: greitas kokybinis tyrimas, įprastinis kiekybinis tyrimas ir didelio-tikslumo kiekybinis nustatymas. Įvairioms mėginių formoms, pavyzdžiui, neapdorotiems ekstraktams, gataviems pramoniniams produktams ir etaloniniams standartams, tinka skirtingi metodai. Toliau pateikiamos bendros pramonės bandymų procedūros ir pagrindiniai dalykai.
I. Plonasluoksnė chromatografija (TLC): greita kokybinė atranka, tinkama išankstiniam neapdorotų produktų tyrimui
TLC yra dažniausiai naudojamas greitojo atrankos metodas citzino gamybos ir ekstrahavimo metu. Tai paprasta naudoti ir ekonomiška-, nes ji visų pirma skirta nustatyti, ar nėra cistino, ir atlikti preliminarų priemaišų įvertinimą. Jis tinka pradiniam žaliavų ekstraktų ir neapdorotų produktų grynumo atrankai, tačiau negali pasiekti tikslaus kiekybinio įvertinimo.
Pagrindinė darbo procedūra: Pirmiausia paruoškite šarminio silikagelio TLC plokštelę, sumaišydami Silica Gel G su natrio hidroksido tirpalu į pastą; tolygiai paskirstykite, vieną valandą aktyvuokite 105 laipsnių temperatūroje ir leiskite atvėsti, kad galėtumėte naudoti. Tada tiriamą mėginį ir etaloninį etaloninį etaloninį citizino tirpalą ištirpinkite metanolyje, kad paruoštumėte atitinkamos koncentracijos tiriamuosius tirpalus ir etaloninius tirpalus, tada uždėkite juos ant TLC plokštelės. Kaip ryškinimo agentą naudokite benzeno-acetono-etilacetato-metanolio (4:2:1:1) tirpiklių sistemą ir leiskite tirpiklio frontui pakilti iki iš anksto nustatyto aukščio. Galiausiai nuimkite plokštelę, leiskite jai išdžiūti ir apipurkškite modifikuotu Dragendorffo reagentu (kalio bismuto jodidu), kad matytumėte.
Rezultato interpretacija: Po vizualizacijos stebėkite dėmių padėtį ir aiškumą. Suderinamajame pavyzdyje matoma vienodos spalvos dėmė ir nėra reikšmingų pašalinių dėmių, o Rf vertė atitinka etaloninio standarto (pramonės -standartinė Rf vertė yra maždaug 0,23). Pašalinių dėmių atsiradimas, uodegos arba reikšmingas Rf vertės nuokrypis rodo didelį priemaišų kiekį ir grynumo standartų nesilaikymą. Šis metodas turi didelių apribojimų: jis siūlo tik kokybinę arba pusiau{5}}kiekybinę analizę, negali tiksliai nustatyti konkrečių grynumo verčių ir duoda labai netikslius mėginių su dideliu priemaišų kiekiu rezultatus.
II. Didelio-našumo skysčių chromatografija (HPLC): pramonės-standartinis kiekybinis metodas, tinkamas galutiniams pramoniniams produktams
HPLC šiuo metu yra standartinis pramoninės -klasės ir komercinės žaliavos citizino grynumo tikrinimo metodas. Jis pasižymi dideliu tikslumu ir atkuriamumu, leidžiančiu tiksliai nustatyti konkrečias grynumo vertes. Jis tinka rafinuotiems produktams, kurių grynumas viršija 90 %, ir yra pagrindinis įmonės kokybės kontrolės ir trečiųjų šalių rinkos testavimo metodas.
Standartinės pramonės chromatografijos sąlygos: naudojama C18 kolonėlė (250 mm × 4,6 mm, 5 μm). Judanti fazė susideda iš sistemos, susidedančios iš 0,05 mol/L natrio-divandenilio fosfato tirpalo, metanolio ir amonio perchlorato (15 ml: 85 ml: 0,5 g). Veikimo parametrai apima pastovų 1,0 ml/min srauto greitį, 305 nm aptikimo bangos ilgį, 25 laipsnių kolonėlės temperatūrą ir 10 μL įpurškimo tūrį. Esant tokioms sąlygoms, citizino smailė yra simetriška ir gera skiriamoji geba, efektyviai atskirianti įprastas alkaloidų priemaišas.
Praktinė bandymo procedūra: pirma, mėginių pirminio apdorojimo{0}}kietieji mėginiai turi būti džiovinami 105 laipsnių temperatūroje 4 valandas iki pastovaus svorio, kad būtų išvengta drėgmės trukdžių; po tikslaus pasvėrimo mėginys ultragarsu ištirpinamas metanolyje, užpildomas iki žymės ir filtruojamas per 0,45 μm organinę membraną. Antra, paruošiami ir įšvirkščiami standartinės kreivės paruošimas{5}}įvairios koncentracijos etaloniniai citizino tirpalai; nubraižyta standartinė kreivė su smailės plotu y-ašyje ir koncentracija x-ašyje, kuri rodo gerą tiesiškumą 0,04–1,2 mg/mL diapazone. Trečia, mėginio analizė{11}}įpurškiamas tiriamasis tirpalas, užregistruojamas smailės plotas ir pagal standartinę kreivę apskaičiuojamas citizino kiekis, siekiant nustatyti galutinio produkto grynumą.
Šiuo metodu efektyviai išvengiama įprastų priemaišų trikdžių ir gaunami rezultatai su minimalia paklaida, atitinkantys visus pramoninės gamybos, kokybės kontrolės ir partijų mėginių ėmimo reikalavimus; jis naudojamas kaip gatavų cytizino produktų (grynumas didesnis nei 98 %) grynumo bandymų pagrindas visoje pramonėje.
III. Skysčių chromatografija-Tandeminė masės spektrometrija (LC-MS/MS): tiksli pėdsakų analizė, tinkama sudėtingoms matricoms
LC-MS/MS yra didelio-tikslumo aptikimo metodas, pirmiausia naudojamas citzino grynumui ir kiekiui sudėtinguose mėginiuose, pvz., augalinėse žaliavose, biologiniuose preparatuose ir maisto matricose, nustatyti. Jis siūlo atskyrimo ir aptikimo galimybes, daug pranašesnes už standartinį HPLC mėginiams, kuriuose yra sudėtingų priemaišų arba analitės pėdsakų. Jis dažnai naudojamas atliekant mokslinius tyrimus, priskiriant aukščiausios klasės- produktų vertę ir tikrinant autentiškumą.
Pagrindinė darbo eiga apima mėginio ekstrahavimą parūgštintu acetonitrilu, o po to gryninimą kietosios -fazės ekstrahavimo (SPE) kolonėlėmis, kad būtų pašalintos trukdančios medžiagos, pvz., pigmentai, polisacharidai ir susiję alkaloidai. Aptikimas atliekamas naudojant kelių reakcijų stebėjimo (MRM) režimą, leidžiantį tiksliai atskirti citiziną ir struktūriškai panašias susijusias priemaišas. Turėdamas itin žemą aptikimo ribą, jis tiksliai išmatuoja mėginių, kuriuose yra mažas citizino kiekis, grynumą, efektyviai įveikiant jautrumą priemaišų trukdžiams, susijusiems su UV spektrofotometrijos ir titravimo metodais. Tačiau dėl didelių įrangos sąnaudų ir sudėtingos testavimo darbo eigos šis metodas netinka įprastiniam partijos bandymui gamyklos nustatymuose.
IV. Diferencinė nuskaitomoji kalorimetrija (DSC): etaloninių medžiagų grynumo priskyrimas ir didelio{1}}grynumo produktų tikrinimas
DSC yra pagrindinis būdas priskirti grynumo vertes nacionalinėms sertifikuotoms etaloninėms medžiagoms ir aukštiems{0}}grynumo etaloniniams standartams (didesnis nei 99,5 %) citzino. Jis nustato grynumą pagal šiluminių savybių skirtumus ir yra plačiai naudojamas patikrinti aukščiausios klasės etaloninių standartų grynumą ir tirti -aukšto -grynumo citaziną, kuris yra vienas tiksliausių aptikimo metodų pramonėje.
Šis metodas nereikalauja sudėtingo pirminio mėginio apdorojimo; jis tiksliai apskaičiuoja priemaišų kiekį ir grynumą, stebėdamas šilumos srauto pokyčius mėginio lydymosi proceso metu ir palygindamas rezultatus su etaloninio standarto termograma, todėl užtikrina išskirtinį stabilumą ir tikslumą. Pagal nacionalinius sertifikuotų etaloninių medžiagų standartus, prieš išduodant reikalavimus atitinkančius grynumo parametrus, citzino etaloninėms medžiagoms turi būti atlikta grynumo vertė, naudojant HPLC ir DSC metodų derinį.
V. Tradiciniai pagalbiniai aptikimo metodai (palaipsniui atsisakoma; tik nuoroda)
UV absorbcija ir rūgščių{0}}šarmų titravimas praeityje buvo plačiai naudojami pramonėje, siekiant nustatyti citizino grynumą; šiuo metu jie naudojami tik greitam žemos-rūšių neapdorotų produktų grynumui įvertinti. UV spektrofotometrija nustato turinį pagal absorbciją esant tam tikriems bangos ilgiams, o titravimas priklauso nuo rūgšties-šarmų neutralizavimo, kad būtų galima nustatyti kiekybinį įvertinimą. Nors abu metodai yra paprasti naudoti ir reikalauja minimalių investicijų į įrangą, jie turi didelių trūkumų: jie yra labai jautrūs priemaišų, pvz., kitų alkaloidų, organinių rūgščių ir pigmentų, trikdžiams, todėl atsiranda didelių matavimo klaidų. Todėl jie tinka tik paprastiems mėginiams, kurių grynumas yra didelis ir kurių priemaišų lygis yra mažas; negali atitikti dabartinių pramonės kokybės kontrolės ir atitikties standartų, juos iš esmės pakeitė HPLC.
VI. Pagrindiniai bandymų aspektai (pramonės standartinė praktika)
1. Mėginio išankstinis apdorojimas: prieš tyrimą visi kietieji citizino mėginiai turi būti džiovinami 105 laipsnių temperatūroje 4 valandas, kol bus pasiektas pastovus svoris, kad būtų pašalinta adsorbuota drėgmė; tai neleidžia drėgmei atskiesti veikliosios medžiagos ir sukelti dirbtinai žemą grynumo rodmenį. Standartinės etaloninės medžiagos ampulės turi būti sunaudotos iš karto po atidarymo ir jų negalima uždaryti pakartotiniam naudojimui.
2. Priemaišų kontrolė: augalų mėginius reikia kruopščiai išvalyti, kad būtų pašalinti polisacharidų, flavonoidų ir kitų alkaloidų likučiai, taip užkertant kelią priemaišoms trukdyti chromatografijos smailėms ir pakenkti bandymo rezultatams.
3. Metodo pasirinkimas: TLC naudojamas išankstiniam neapdorotų produktų atrankai; HPLC parenkamas pramoninės gatavos produkcijos kokybės kontrolei; LC-MS/MS pasirenkama pavyzdžiams su sudėtingomis matricomis; o aukštų -grynumo standartų tyrimams naudojamas HPLC ir DSC derinys.
Santrauka
Sukurta pakopinė pramoninė citizino grynumo tyrimo sistema. HPLC tapo pagrindiniu pramoninės gamybos ir komercinės prekybos standartu dėl savo tikslumo, efektyvumo ir ekonomiškumo{1}}. TLC tinka greitam preliminariam patikrinimui, o LC-MS/MS ir DSC atitinka aukštus-sudėtingų mėginių tikslumo testavimo reikalavimus ir aukštus{5}}grynumo standartus. Kiekvienas metodas atlieka specifinį vaidmenį, kartu sudarydamas visapusišką citizino grynumo tyrimo sprendimą.
Shaanxi Lv Ke Chun Yuan Biotechnology Co., Ltd
Mūsų adresas
Huaxia Yue World, Weibin rajonas, Baoji miestas, Shaanxi provincija
Telefono numeris
+86-13571783771
El-paštas
